La fluorescencia es un proceso de emisión en el cual las moléculas son excitadas por la absorción de radiación electromagnética. Las especies excitadas se relajan al estado fundamental, liberando su exceso de energía en forma de fotones.
Una vez excitada, la molécula pasará al modo vibracional de menor energía del estado excitado. El fotón emitido por fluorescencia tiene menos energía que el absorbido. Por tanto, posee una frecuencia menor y emite a mayor longitud de onda.
No existe un gran número de sistemas químicos a los que puedan aplicarse los métodos de fluorescencia, por lo que su uso está bastante restringido. Los sistemas que pueden hacerse fluorescer pertenecen al grupo de los FLUORÓFOROS. Pero igual que algunos presentan esta característica, su fluorescencia puede verse debilitada debido a la interacción con otras moléculas, ya que el fluoróforo esta normalmente en disolución. Como consecuencia de esta interacción se puede producir una pérdida de emisión fluorescente. Se trata de un proceso de desexcitación no radiactiva provocado por una molécula ajena al fluoróforo, que recibe el nombre de desactivador o quencher.
EL FENÓMENO DE LA EMISIÓN DE FLUORESCENCIA:
-La espectrometría de fluorescencia (también llamada fluorometría o espectrofluorimetría) es un tipo de espectroscopia electromagnética que analiza la fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las moléculas de ciertas compuestos y provoca que emitan luz de una menor energía, generalmente luz visible( aunque no necesariamente).
-La fluorescencia es un proceso de fotoluminisciencia:a) Muy sensible: 3 órdenes de magnitud mayor que la espectroscopia de absorción.b) Menor campo de aplicación: menor número de sustancias con fluorescencia apreciable.
INSTRUMENTOS PARA LA MEDICIÓN DE FLUORESCENCIA: -FLUORÓMETRO O FLUORÍMETRO: Instrumento empleado en fluorometría, constituido por una fuente de energía para inducir fluorescencia, filtros monocromáticos para la selección de la longitud de onda y un detector. El más utilizado es el fluorómetro de filtro. Este instrumento consta de una lámpara de mercurio como fuente de excitación, un filtro primario para transmitir la longitud de onda excitacional deseada y la cubeta porta-muestras. El tubo fotomultiplicador mide la emisión fluorescente. El filtro secundario, entre la muestra y el fotodetector, se elige para transmitir la fluorescencia y para absober la radiación de excitación dispersada.
-ESPECTROFLUORÓMETRO: sirve para medir compuestos que emiten un determinado tipo de radiación al ser excitados o irradiados por una luz con una longitud de ondaconcreta. Este equipo es capaz de seleccionar las radiaciones de emisión y excitación así como de realizar "barridos", es decir, lecturas de espectros de luz.
Una vez excitada, la molécula pasará al modo vibracional de menor energía del estado excitado. El fotón emitido por fluorescencia tiene menos energía que el absorbido. Por tanto, posee una frecuencia menor y emite a mayor longitud de onda.
No existe un gran número de sistemas químicos a los que puedan aplicarse los métodos de fluorescencia, por lo que su uso está bastante restringido. Los sistemas que pueden hacerse fluorescer pertenecen al grupo de los FLUORÓFOROS. Pero igual que algunos presentan esta característica, su fluorescencia puede verse debilitada debido a la interacción con otras moléculas, ya que el fluoróforo esta normalmente en disolución. Como consecuencia de esta interacción se puede producir una pérdida de emisión fluorescente. Se trata de un proceso de desexcitación no radiactiva provocado por una molécula ajena al fluoróforo, que recibe el nombre de desactivador o quencher.
EL FENÓMENO DE LA EMISIÓN DE FLUORESCENCIA:
-La espectrometría de fluorescencia (también llamada fluorometría o espectrofluorimetría) es un tipo de espectroscopia electromagnética que analiza la fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las moléculas de ciertas compuestos y provoca que emitan luz de una menor energía, generalmente luz visible( aunque no necesariamente).
-La fluorescencia es un proceso de fotoluminisciencia:a) Muy sensible: 3 órdenes de magnitud mayor que la espectroscopia de absorción.b) Menor campo de aplicación: menor número de sustancias con fluorescencia apreciable.
INSTRUMENTOS PARA LA MEDICIÓN DE FLUORESCENCIA:
-FLUORÓMETRO O FLUORÍMETRO: Instrumento empleado en fluorometría, constituido por una fuente de energía para inducir fluorescencia, filtros monocromáticos para la selección de la longitud de onda y un detector. El más utilizado es el fluorómetro de filtro. Este instrumento consta de una lámpara de mercurio como fuente de excitación, un filtro primario para transmitir la longitud de onda excitacional deseada y la cubeta porta-muestras. El tubo fotomultiplicador mide la emisión fluorescente. El filtro secundario, entre la muestra y el fotodetector, se elige para transmitir la fluorescencia y para absober la radiación de excitación dispersada.
-ESPECTROFLUORÓMETRO: sirve para medir compuestos que emiten un determinado tipo de radiación al ser excitados o irradiados por una luz con una longitud de ondaconcreta. Este equipo es capaz de seleccionar las radiaciones de emisión y excitación así como de realizar "barridos", es decir, lecturas de espectros de luz.